常用的層析方法
層析填料是決定拄效的主要因素。 填料應(yīng)具有的性能是不溶于所使用的流動(dòng)相中，不使欲分離的物質(zhì)破壞或分解、惰性大，可逆性強(qiáng)，吸附容量大，同時(shí)顆粒直徑范圍要狹．因此在選擇填料時(shí)事先應(yīng)對(duì)其性能有充分的了解，下面將按常用填料名稱(chēng)分類(lèi)介紹。 1 硅膠層析 （1）性質(zhì)
層析硅膠為一多孔性物質(zhì)，可用通式Si02·xH20表示．它具有多孔性的硅氧環(huán)的交鍵結(jié)構(gòu)，由于其骨架表面具有很多游離(I)、鍵合(Ⅱ)和鍵合—活性(III)狀態(tài)的硅醇基·(silanol)基團(tuán)它能夠通過(guò)氫鍵與極性或不飽和分子相互作用，同時(shí)能吸附多量的水分．當(dāng)加熱活化(100一110℃)時(shí)，硅膠表面因氫鍵所吸附的水分能可逆地被除去；但溫度升高**500℃時(shí)，硅膠表面的硅醇基進(jìn)一步脫水縮合轉(zhuǎn)變?yōu)楣柩跬殒I即硅氧環(huán)表面(A)及稠合環(huán)氧環(huán)烷(B)，從而喪失了因氫鍵吸附水分的活性不再具有吸附劑的性質(zhì)．若用水處理亦不能恢復(fù)其吸附活性
加熱**1100℃時(shí)則結(jié)合水失盡．由于硅膠的吸附能力與硅羥基數(shù)量有關(guān)，因此活化時(shí)不宜在較高溫度進(jìn)行，一般在170℃以上即有少量結(jié)合水失去．硅膠的吸附性能取決于硅膠中硅羥基的數(shù)目，其次是含水量，它隨著水分的增加而降低(表l—3)．若吸水量超過(guò)12％，吸附力極弱，不能用作吸附層析，只可用作分配層析的載體．硅膠的表面積、表面結(jié)構(gòu)、微孔體積及微孔半徑均直接影響著層析分離的效果(生產(chǎn)都得測(cè)出型號(hào))．另一方面因它具有弱的非特異性吸附，能同樣吸附極性、非極性飽和和不飽和分子，所以硅膠具有吸附層析與分配層析的雙重性．同時(shí)硅膠又是一種弱酸，其表面的硅醇基能釋放弱酸性的氫離子，解離常數(shù)為10 -6—10 -8，是一種弱酸性陽(yáng)離子交換劑，當(dāng)遇到較強(qiáng)的堿性化合物時(shí)，則可因離子交換作用而吸附堿性化合物。
硅膠表面的硅羥基能與各種醇如氰乙醇、正辛醇、聚乙二醇在一定溫度下加熱脫水后生成單分子鍵合固定相(Si—O—C型)，與十八烷基三氯硅烷生成烷基化學(xué)鍵合相(Si—O—Si—C型)． 另外用S0Cl2將硅膠表面氯化后，與各種有機(jī)銨反應(yīng)生成具有Si—O—Si≡N鍵的各種不同極性基團(tuán)的化學(xué)鍵合相，這大大有助于提高分離選擇，在液相色譜中占有極為重要的地位，并普遍用于高效液相層析．
層析硅膠應(yīng)是中性無(wú)色顆粒，由于制備過(guò)程中接觸強(qiáng)酸，常帶有酸性，故在使用前應(yīng)檢查其水浸液的酸度，不低于pH5時(shí)才可使用．否則應(yīng)用水洗**中性，再在110℃活化24h．在特殊情況下，硅膠須經(jīng)6N*鹽酸及氯仿等有機(jī)溶劑預(yù)洗，除去其中所含的鐵離子及有機(jī)脂溶性雜質(zhì)．硅膠在甲醇、水等強(qiáng)極性溶劑中有一定的溶解性，約為0.01％．當(dāng)溶液在pH9以上則溶解度急劇上升，此點(diǎn)在選擇溶劑時(shí)應(yīng)注意，否則會(huì)將流分中溶解硅膠誤認(rèn)為植物成分． 硅膠層析有時(shí)可以加入一種復(fù)合試劑，以改良吸附性能，提高分離效果．通常用硝酸銀處理硅膠對(duì)不飽和烴類(lèi)有極好的分離作用．改良吸附劑制備一般用1—10%復(fù)合試劑的水或丙酮溶液，與硅膠混勻，待稍干后于110℃干燥即可．
硅膠層析適用范圍廣，能用于非極性化合物也能用于極性化合物，如芳香油，萜類(lèi)，甾體，生物堿，強(qiáng)心甙，蒽酮類(lèi)，酸性、酚性化合物，磷脂類(lèi)，脂肪酸，氨基酸以及一系列合成產(chǎn)物等的分離． (2)層析柱的制備與加樣
硅膠裝柱一般用濕法，即將硅膠混懸于裝柱溶劑中，不斷攪拌，待內(nèi)中空氣泡除去后，連同溶劑一起傾入層析柱中，層析柱中硅膠段直徑與長(zhǎng)度之比一般為1：20—30． 若硅膠的顆粒較細(xì)，而粒度分布范圍狹，則可采用短柱(1：5)，這樣不僅增大了截面積，而且也增加了樣品的載量．硅膠**好一次傾入，否則由于不同粒度大小的硅膠沉降速度不一，使硅膠柱有明顯的分段現(xiàn)象，影響分離效果．另亦可采用干法裝往，將所需硅膠一次傾入柱中，然后礅緊**硅膠高度不改變?yōu)橹?。欲分離樣品與吸附劑的比例約為1：30—60，若作為分配層析比例應(yīng)加大，主要根據(jù)分離物質(zhì)的難易采確定．
當(dāng)采用分配層析時(shí)，應(yīng)先將預(yù)先選定的固定相溶劑如水、緩沖液或極性溶劑加入硅膠中，一般比例為1：0.5—1較為適中，攪拌混合均勻，傾入預(yù)先選定的移動(dòng)相溶劑中并激烈攪拌，使兩相互相飽和達(dá)到平衡．層析管中事先放入用固定相溶劑劇裂振搖飽和后的移動(dòng)相，將上述吸著固定相的硅膠按濕法裝柱，不斷輕敲管壁，使均勻緊密．另外亦可采用加硅膠于固定相飽和的移動(dòng)相中，按濕法裝柱，然后用固定相飽和的流動(dòng)相通過(guò)硅膠拄，使達(dá)到層析時(shí)穩(wěn)定的平衡條件．
樣品上柱可采取二種方式，如樣品能溶于移動(dòng)相可用少量移動(dòng)相溶解，從柱頂加入，盡可能保留加樣色帶狹，再行展開(kāi)，如樣品難溶于移動(dòng)相，則可溶于適當(dāng)?shù)娜軇栌诟稍锕枘z上，待溶劑揮發(fā)盡后，加適量的移動(dòng)相拌勻再上柱。并在上面覆蓋一薄層純凈的砂，然后用移動(dòng)相展開(kāi) (3)層析溶劑的選擇
層析過(guò)程中溶劑的選擇，對(duì)組分分離關(guān)系極大．一般沒(méi)有可循的規(guī)律．通常是根據(jù)物質(zhì)的極性度采用相應(yīng)的極性溶劑來(lái)洗脫．在實(shí)際吸附層析中是采用從低極性逐步遞增極性的梯度洗脫方式．溶劑的洗脫力隨介電常數(shù)(表1—4)增高而加大．往往借助于硅膠薄層層析的結(jié)果來(lái)摸索分離條件，基本上可以套用于柱層析．兩者所不同者在于樣品與硅膠的用量比例，故通常往層析所用的溶劑比薄層層析展開(kāi)劑極性略偏?。僬呖蓞㈤喦叭朔蛛x同類(lèi)型物質(zhì)時(shí)所用的溶劑系統(tǒng)條件．如采用分配層析可先用紙層析方法探索分離條件．#p#分頁(yè)標(biāo)題#e#
(4)硅膠的再生
硅膠的再生一般可用乙醇或甲醇洗滌，除去溶劑，烘干活化處理即可使用．必要時(shí)用 0．5％氫氧化鈉水溶液浸泡洗滌，過(guò)濾，水洗，再以5—10％鹽酸浸泡洗滌，后用蒸餾水洗**中性，110℃活化，過(guò)篩即可
