在使用AKTA前，請先閱讀本規(guī)程，并了解所需層析方法的

原理。初次使用請在有經(jīng)驗的人指導(dǎo)下進(jìn)行。 

一. 緩沖液和層析的樣品的準(zhǔn)備： 

1. 溶液需用去離子水、超純水或注射用水配制，除NaOH和乙醇外，所有

用于層析的緩沖液需經(jīng)0.45μm孔徑的濾膜過濾，并盛裝于用0.45μm孔徑濾膜過濾的水**少蕩洗4次的容器中。 

2. 實驗過程中用到的20%乙醇應(yīng)用新的無水乙醇和0.45μm孔徑濾膜過濾的

水配制；0.1M NaOH用0.45μm孔徑濾膜過濾的水和固體NaOH配制。 3. 盛裝緩沖液的應(yīng)使用小口有蓋圓底容器，**好可滅菌，如藍(lán)口瓶，無水

乙醇瓶。燒杯（敞口，易污染長菌）、血清瓶（多死角，易長菌）不適合用于盛裝緩沖液。 

4. 配制的緩沖液成分不宜濃度過高，如硫銨不得超過2M（約50%飽和硫銨）；

NaCl不得超過4M；PB不得超過500mM；以免析出固體損壞層析介質(zhì)與儀器。 

5. 緩沖液要多次使用，需在120℃滅菌20min，此后置于4℃保存，下回層

析時平衡**室溫使用，使用前應(yīng)搖晃無可見異物方可使用，否則，應(yīng)重新過濾。 

6. 用于層析的樣品通常要用12000rpm離心10min，上清用0.22μm過濾后才

可以用于層析。經(jīng)過層析后收集的樣品如無沉淀可免去離心和過濾的步驟。7. 用于離子，疏水層析的樣品應(yīng)經(jīng)預(yù)實驗不會在該層析條件下樣品在低鹽

和高鹽條件下穩(wěn)定不析出沉淀。 

二. AKTA儀器的使用： 

1.開關(guān)機(jī) 

⑴開啟電腦，檢查電腦運(yùn)行狀態(tài)是否正常。 

⑵開啟AKTA總電源按鈕(AKTA儀器一般分為2-3個模塊，每個模塊有單獨的電源開關(guān)，通常為開啟狀態(tài)，總電源開關(guān)一般用于開關(guān)儀器)，稍后開啟AKTA控制軟件UNICORN，并等待儀器自檢和聯(lián)機(jī)，每個模塊自檢成功后會發(fā)出“嘀---嘀嘀”的聲音，相應(yīng)在儀器上顯示自檢通過的字樣。軟件開啟后會同時打開4個界面，從左到右依次是：文件管理界面、程序編輯界面，儀器控制界面，圖線分析界面。與儀器連接成功后，儀器控制界面下方儀器簡圖線路變成綠色，儀器會從泵內(nèi)走一段液體**廢液。如未連接成功，操作界面會彈出提示窗口，此時請檢查儀器與電腦數(shù)據(jù)線插頭是否松動，而后關(guān)閉儀器和程序，重新開啟，必要時可重新啟動電腦。如經(jīng)過以上步驟還無法連接，請聯(lián)系管理員。 

⑶使用完儀器應(yīng)在文件管理界面關(guān)閉UNICORN程序，系統(tǒng)將提示是否鎖定界面，選否，待UNICORN完全退出后方可關(guān)閉儀器電源。使用完畢后需清理臺面，并登記使用事項。 2．AKTA儀器的運(yùn)行⑴在打開流速之前，將AB管道插入緩沖液中，遵循A低鹽，B高鹽或者A高pH, B低pH的原則，若只用一種緩沖液，請將AB管道都插入緩沖液中，然后AB泵各走50%。在裝上柱子之前應(yīng)先用高流速將管道中替換成自己相應(yīng)緩沖液。 

⑵若樣品量低于10mL，用上樣環(huán)進(jìn)樣比較簡便和準(zhǔn)確。選用合適上樣環(huán)，在裝柱前連接上儀器，在清洗管道時調(diào)**inject一并清洗，并且裝上層析柱后隨柱子一起平衡。上樣時，先在inject下插入注射器，調(diào)**load，打入緩沖液，改為inject，上樣。 

⑶在儀器控制界面可通過電腦控制流速，A/B泵流速比例，上樣環(huán)狀態(tài)切換，UV歸零，壓力上限，以及標(biāo)注和定時暫停等。流速和壓力控制要按照不同的介質(zhì)、柱型號的使用方法嚴(yán)格嚴(yán)格執(zhí)行（參數(shù)見附表）。特別需要注意的是，在使用時要設(shè)定**高壓力警報，以避免操作不當(dāng)造成柱子爆裂，甚**儀器損壞。AKTA使用過程中請檢查各部分的運(yùn)行情況，如有問題及時聯(lián)系管理員。 

⑷同時，在使用時，請確保位于儀器一側(cè)的，50mL管裝的20%乙醇正在循環(huán)流動（用于清洗壓力泵），并且20%乙醇無渾濁或干涸現(xiàn)象。若發(fā)生斷流或液體渾濁，請及時更換并用注射器抽取，讓液體充滿管道，避免對壓力泵造成損害。 

⑸使用NaOH以及鹽濃度較高的緩沖液清洗管道或柱子時盡量減少漏液，如漏到儀器上時請及時擦拭干凈，避免腐蝕AKTA。柱子使用完后要及時拆卸，以便他人使用。注意柱子拆卸后要在相應(yīng)接口連接一條管道，避免污染雜質(zhì)，染菌或檢測探頭由于緩沖液干涸鹽析造成損壞。 

⑹當(dāng)發(fā)現(xiàn)壓力檢測器或pH計不準(zhǔn)時，及時通知管理員進(jìn)行校正。 ⑺運(yùn)行結(jié)束后請及時保存實驗結(jié)果，并歸于各人自己目錄下，便于整理和存檔。 

三、層析柱和介質(zhì)的使用： 

1.裝柱 

⑴原先在溶液中的介質(zhì)通?？梢杂盟蛞掖迹?0%）裝柱，干粉介質(zhì)（如G25）需在水中溶脹1h以上，方可裝柱。CHTII需在200mM PB溶液中溶脹1h后，用200mM PB裝柱。 

⑵拆下柱子，清洗柱腔和管道，將位于下方的一端（較短的）接上AKTA儀器，揭下防水膜，以5~10mL/min流速排出防水膜下的氣泡，蓋上防水膜，裝上柱腔，繼續(xù)在柱腔底部注滿2cm左右的溶液，將計算好體積的介質(zhì)貼壁緩慢倒入柱腔內(nèi)，要防止氣泡的產(chǎn)生。將管道從儀器上卸下，讓溶液流出，介質(zhì)隨著沉降。當(dāng)介質(zhì)沉降完全后，堵上下端出口。 

⑶將位于上方的一端接上儀器如⑵排去氣泡后，向柱腔內(nèi)緩慢注水**上柱面，將上端插入柱腔，鎖在介質(zhì)面上方約1cm處。 #p#分頁標(biāo)題#e#

⑷按附表中相應(yīng)柱子介質(zhì)的流速壓介質(zhì)5min，當(dāng)介質(zhì)面穩(wěn)定后用筆在柱外相應(yīng)位置做記號。稍微松開上方，將上端壓**標(biāo)記處，（CHT II介質(zhì)壓**標(biāo)記上方1mm處）旋緊。層析柱就可以使用了。⑸分子篩類介質(zhì)應(yīng)倒裝層析柱。 

2．層析柱和介質(zhì)使用注意事項 

⑴TSK的高壓預(yù)裝柱也可以在AKTA上使用，但要注意流速和壓力（詳見附表） 

⑵在裝柱和卸柱時要將柱頭上的液體充滿，再連上連接頭或堵頭。裝柱時要先用1/2流速倒沖柱子，趕出氣泡，再連上接頭，以免氣泡進(jìn)入介質(zhì)內(nèi)。 

⑶實驗過程中應(yīng)保持柱子豎直，特別是分子篩。整個實驗操作過程中都要防止氣泡進(jìn)入介質(zhì)內(nèi)。常壓層析柱使用較久后，柱壓可能會上升，應(yīng)適當(dāng)降低流速。若層析柱在實驗過程中出現(xiàn)泵壓急劇升高，超過限度的情況，請聯(lián)系管理員。 

⑷在實驗結(jié)束后，非高壓柱應(yīng)用0.1M NaOH清洗，**后保存于NaOH或20%乙醇中；CHT II介質(zhì)用0.1M NaOH清洗不宜超過2倍柱體積，**后應(yīng)保存于水或20%乙醇中；高壓預(yù)裝柱除G3000SW外 用0.1M NaOH清洗，保存于超純水中；G3000 SW用超純水清洗，保存于超純水中。柱子卸下時，2端柱頭都應(yīng)先充滿液體，再接上堵頭，放4℃保存，經(jīng)常使用的可放室溫保存。 

四. 使用后登記及臺面清潔 

1. 將使用的各部件放置原有位置，在登記表上如實填寫儀器使用狀態(tài)，登

記使用日期和使用人。 

2. 帶走自己的物品，保持桌面清潔。再次注意，儀器上如有緩沖液外漏，請擦拭干凈以免腐蝕儀器。