摘要：紙層析是用濾紙作為載體的一種色層分析法，其原理主要是利用混合物中各組分在；流動(dòng)相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分離。濾紙上吸附的水為固定相（濾紙纖維常能吸20%左右的水），有機(jī)溶劑如乙醇等為流動(dòng)相，色素提取液為層析試樣。把試樣點(diǎn)在濾紙的濾液細(xì)線位置上，當(dāng)流動(dòng)相溶劑在濾紙的毛細(xì)管的作用下，連續(xù)不斷地沿著濾紙前進(jìn)通過(guò)濾液細(xì)線時(shí)，試樣中各組份便隨著流動(dòng)相溶劑向前移動(dòng)，并在流動(dòng)相和固定相溶劑之間連續(xù)一次有一次的分配。結(jié)果分配比比較大的物質(zhì)移動(dòng)速度較快，移動(dòng)距離較遠(yuǎn)；分配比較小的物質(zhì)移動(dòng)較慢，移動(dòng)距離較近，試樣中各組分分別聚集在濾紙的不同的位置上，從而達(dá)到分離。  

關(guān)鍵詞：紙層析，分離，速度  

前言：層析法是目前廣泛應(yīng)用的一種分離技術(shù)。本世紀(jì)初俄*植物學(xué)家M.Tswett發(fā)現(xiàn)并使用這一技術(shù)證明了植物的葉子中不僅有葉綠素還含有其它色素?，F(xiàn)在層析法已成為生物化學(xué)、分子生物學(xué)及其它學(xué)科*域有效的分離分析工具之一。  

1.原理 

層析法是利用不同物質(zhì)理化性質(zhì)的差異而建立起來(lái)的技術(shù)。所有的層析系統(tǒng)都由兩個(gè)相組成：一是固定相，它或者是固體物質(zhì)或者是固定于固體物質(zhì)上的成分；另一是流動(dòng)相，即可以流動(dòng)的物質(zhì)，如水和各種溶媒。當(dāng)待分離的混合物隨溶媒（流動(dòng)相）通過(guò)固定相時(shí)，由于各組份的理化性質(zhì)存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附、溶解、結(jié)合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量對(duì)比）不同，而且隨溶媒向前移動(dòng)，各組份不斷地在兩相中進(jìn)行再分配。與固定相相互作用力越弱的組份，隨流動(dòng)相移動(dòng)時(shí)受到的阻滯作用小，向前移動(dòng)的速度快。反之，與固定相相互作用越強(qiáng)的組份，向前移動(dòng)速度越慢。分部收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組份，從而達(dá)到將各組份分離的目的。 

2.應(yīng)用與實(shí)踐： 

（一）凝膠層析法 

  凝膠層析又稱分子篩過(guò)濾、排阻層析等。它的突出優(yōu)點(diǎn)是層析所用的凝膠屬于惰性載體，不帶電荷，吸附力弱，操作條件比較溫和，可在相當(dāng)廣的溫度范圍下進(jìn)行，不需要有機(jī)溶劑，并且對(duì)分離成分理化性質(zhì)的保持有獨(dú)到之處。對(duì)于高分子物質(zhì)有很好的分離效果。 

（二）離子交換層析法 

  離子交換層析法是以具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相，利用它與流動(dòng)相中的離子能進(jìn)行可逆的交換性質(zhì)來(lái)分離離子型化合物的一種方法。 

（三）高效液相層析法 高效液相層析法（HPLC）是近二十年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新穎快速的分離技術(shù)。它是在經(jīng)典液相層析法基礎(chǔ)上，引進(jìn)了氣相層析的理論具有氣相層析的全部?jī)?yōu)點(diǎn)。由于HPLC分離能力強(qiáng)、測(cè)定靈敏度高，可在室溫下進(jìn)行，應(yīng)用范圍極廣，無(wú)論是極性還是非極性，小分子還是大分子，熱穩(wěn)定還是不穩(wěn)定的化合物均可用此法測(cè)定。對(duì)蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、生物堿、類固醇和類脂等尤為有利。 

高效液相層析法的基本概念和分離理論與經(jīng)典的液相色譜法及氣相色譜法一致，因而其塔板理論及動(dòng)力學(xué)理論等都可用于高效液相層析。 （四）親和層析法 

親和層析是利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有特異的親和力，從而達(dá)到分離目的的一類特殊層析技術(shù)。 

具有專一親和力的生物分子對(duì)主要有：抗原與抗體、DNA與互補(bǔ)DNA或RNA、酶與它的底物或競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑、激素（或藥物）與它們的受體、維生素和它的特異結(jié)合蛋白、糖蛋白與它相應(yīng)的植物凝集素等。可親和的一對(duì)分子中的一方以共價(jià)鍵形式與不溶性載體相連作為固定相吸附劑，當(dāng)含有混合組份的樣品通過(guò)此固定相時(shí)，只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì)，才能被固定相吸附結(jié)合，其它沒(méi)有親和力的無(wú)關(guān)組份就隨流動(dòng)相流出，然后改變流動(dòng)組成份，將結(jié)合的親和物洗脫下來(lái)。親和層析中所用的載體稱為基質(zhì)，與基質(zhì)共價(jià)連接的化合物稱配基。   親和層析純化過(guò)程簡(jiǎn)單、迅速，且分離效率高。對(duì)分離含量極少又不穩(wěn)定的活性物質(zhì)尤為有效。但本法必須針對(duì)某一分離對(duì)象，制備專一的配基和尋求層析的穩(wěn)定條件，因此親和層析的應(yīng)用范圍受到了一定的限制。 

  親和層析可用于純化生物大分子：稀溶液的濃縮；不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的貯藏；從純化的分子中除去殘余的污染物；用免疫吸附劑吸附純化對(duì)此尚無(wú)互補(bǔ)配體的生物大分子；分離核酸是親和層析應(yīng)用的一個(gè)重要方面。 

 

（五）聚焦層析法 

  聚焦層析是一種操作簡(jiǎn)單、廉價(jià)的層析技術(shù)。它的原理是根據(jù)各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同進(jìn)行分離的過(guò)程，因此本方法具有高分辨、高度濃縮和高度專一等特點(diǎn)。聚焦層析所用的凝膠shou先用高pH溶液平衡，然后用多元緩沖液進(jìn)行洗脫，多元緩沖液pH呈梯度下降。