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凝膠層析淺談

凝膠層析又稱(chēng)分子篩過(guò)濾、排阻層析等。它的突出優(yōu)點(diǎn)是層析所用的凝膠屬于惰性載體,不帶電荷,吸附力弱,操作條件比較溫和,可在相當(dāng)廣的溫度范圍下進(jìn)行,不需要有機(jī)溶劑,并且對(duì)分離成分理化性質(zhì)的保持有獨(dú)到之處。對(duì)于高分子物質(zhì)有很好的分離效果。凝膠層析是按照蛋白質(zhì)分子量大小進(jìn)行分離的技術(shù),又稱(chēng)之凝膠過(guò)濾,分子篩層析或排阻層析 凝膠種類(lèi)及性質(zhì) 
(一)交聯(lián)葡聚糖凝膠(Sephadex) 
⑴Sephadex G交聯(lián)葡聚糖的商品名為Sephndex,不同規(guī)格型號(hào)的葡聚糖用英文字母G表示,G后面的阿拉伯?dāng)?shù)為凝膠得水值的10倍。例如,G-25為每克凝膠膨脹時(shí)吸水2.5克,同樣G-200克每克千膠吸水20克。交聯(lián)葡聚糖凝膠的種類(lèi)有G-10,G-15,G-25,G-50,G-75,G-100,G-150,和G-200。因此,“G”反映,凝膠的交聯(lián)程度,膨脹程度及分部范圍。 各種葡聚糖凝膠的分離范圍與用途:    
Sephadex G-10 葡聚糖凝膠 G-10 分離范圍<700 適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離    Sephadex G-15 葡聚糖凝膠 G-15 分離范圍<1500 適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離    Sephadex G-15 葡聚糖凝膠 G-15 分離范圍<1500 適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離    Sephadex G-25 葡聚糖凝膠 G-25 分離范圍 1000-5000 適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離  Sephadex G-50 葡聚糖凝膠 G-50 分離范圍 1500-30000    Sephadex G-75  葡聚糖凝膠 G-75 分離范圍 3000-80000  Sephadex G-100 葡聚糖凝膠 G-100 分離范圍 4000-150000  Sephadex G-150 葡聚糖凝膠 G-150 分離范圍 5000-300000   Sephadex G-200 葡聚糖凝膠 G-200 分離范圍 5000-600000  ⑵ 
Sephadex LH-20,是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物, 能溶于水及親脂溶劑,用于分離不溶于水的物質(zhì)。 
Sephadex LH-60,是─Sephadex G-50的羧丙基衍生物, 能溶于水及親脂溶劑,用于分離不溶于水的物質(zhì)。 (3) 
DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝膠 A-25 顆粒大?。?0-120μm 分離大?。盒〉鞍准熬薮蠓肿?   
DEAE Sephades A-50 DEAE DEAE葡聚糖凝膠 A-50 顆粒大?。?0-120μm,分離范圍:小蛋白及巨大分子 (4) 
sephacryl:為葡聚糖偶聯(lián)丙烯基,再和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的介質(zhì)。它有較高的硬度,能承受比普通凝膠更大的靜水壓力,由于屬于部分大網(wǎng)孔型凝膠,可用于分離蛋白質(zhì)、核酸、多糖和蛋白聚糖甚**是病毒顆粒 
Sephacryl S100分離范圍是1kD~100kD之間; Sephacryl S200分離范圍是5kD~250kD之間; Sephacryl S300分離范圍是10kD~1500kD之間 AKTA用此填料。 (二)瓊脂糖凝膠:瑞典稱(chēng)sepharose;美*稱(chēng)Bio-gel A;英*稱(chēng)Segavac;丹麥稱(chēng)Gelarose。Sepharose主要有三種型號(hào):2B,4B,6B,阿拉伯?dāng)?shù)字表示凝膠中干膠的百分含量。  
Bio-GA有6個(gè)型號(hào):0.5M,1.5M,5M,15M,50M,150M。阿拉伯?dāng)?shù)字乘以1000000表示排阻限度。Sagavac分為:2F,4F,6F,8F,10F2℃4C6℃8C10℃阿拉伯?dāng)?shù)字表示凝膠中干膠的百分含量,F(xiàn)表示粉末狀,C表示顆粒狀。Gelarose有5種類(lèi)型:2%,4%,6%,8%,10%。百分?jǐn)?shù)表示干膠量。瓊脂糖凝膠屬于大孔膠,由于其工作范圍的下限幾乎相當(dāng)于葡聚糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠的上限,所以多用于分離400000以上的物質(zhì),比如核酸和病毒。瓊脂糖凝膠是依靠糖鏈之間的次級(jí)鏈如氫鍵來(lái)維持網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的疏密依靠瓊脂糖的濃度。一般情況下,它的結(jié)構(gòu)是穩(wěn)定的,可以在許多條件下使用(如水,pH4-9范圍內(nèi)的鹽溶液)。瓊脂糖凝膠在40℃以上開(kāi)始融化,也不能高壓消毒,可用化學(xué)滅菌活處理。 
Sepharose 6B 瓊脂糖凝膠 6B 分離范圍:1000-5000,適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離  ConA-Sepharose ConA瓊脂糖凝膠 分離范圍:1000-5000,適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離 DEAE Sepharose FF DEAE瓊脂糖凝膠 FF 分離范圍:3000-80,000    DEAE Sepharose CI-6B 瓊脂糖凝膠CI-6B 分離范圍:5000-300,000   (三)聚丙烯酰胺凝膠: 
是一種人工合成凝膠,是以丙烯酰胺為單位, 由甲叉雙丙烯酰胺交聯(lián)成的,經(jīng)干燥粉碎或加工成形制成粒狀,控制交聯(lián)劑的用量可制成各種型號(hào)的凝膠。交聯(lián)劑越多,孔隙越小。聚丙烯酰胺凝膠的商品為生物膠-P (Bio-Gel P),由美*Bio-Rod廠生產(chǎn),型號(hào)很多,從P-2**P-300共10種,P 后面的數(shù)字再乘1000就相當(dāng)于該凝膠的排阻限度。這種膠在極端ph下可被水解,水解后形成的羧基,具有離子交換的性質(zhì)。 
 
(四)聚苯乙烯凝膠商品為Styrogel , 具有大網(wǎng)孔結(jié)構(gòu), 可用于分離分子量1600到40,000,000的生物大分子,適用于有機(jī)多聚物,分子量測(cè)定和脂溶性天然物的分級(jí),凝膠機(jī)械強(qiáng)度好,洗脫劑可用甲基亞砜