薄層色譜是一種微量分析的分離過(guò)程，是一種簡(jiǎn)便、快速、微量的層析方法。它將樣品點(diǎn)在以玻璃板或鋁、塑料等片材為載體的多孔吸附劑薄層的固定相上,利用流動(dòng)相在特定的展開(kāi)室中將混合物中的組份推移到不同距離處，在色譜展開(kāi)整個(gè)過(guò)程中，樣品的成份受到正反不同的力的作用。
(1). 流動(dòng)相利用毛細(xì)管力帶著樣品穿過(guò)固定相。
(2). 樣品與固定相的相互作用是指組份在移行過(guò)程中由于偶極-（誘導(dǎo)）-偶極相互作用，氫鍵和范德華力的作用而產(chǎn)生不同程度的延緩、吸附、分散、離子交換和絡(luò)合等分離機(jī)理。
由于樣品組份與流動(dòng)相和固定相之間的相互作用力程度不同，整個(gè)毛細(xì)管流動(dòng)過(guò)程中分離運(yùn)動(dòng)都在進(jìn)行?；谶@點(diǎn)，TLC系統(tǒng)（流動(dòng)相和固定相）必須與樣品很好地匹配。
用顯色試劑處理，許多組份可在日光或紫外燈光下檢視。色譜可用肉眼或使用光密度計(jì)和照相機(jī)記錄或影像系統(tǒng)方法來(lái)評(píng)價(jià)。
一、薄層板
1.手工自制板 (1). 玻璃板的要求
用于制備薄層板的玻璃板要求表面光潔、平整，**好使用厚薄 1~2mm 的優(yōu)質(zhì)平板玻璃，普通窗玻璃一般不宜用于制作薄層板，玻璃板需洗凈**不掛水，晾干，貯存于干燥潔凈處備用。玻璃板反復(fù)使用時(shí)，應(yīng)注意經(jīng)常用洗液及堿液清洗，保持玻璃板面的光潔是保證薄層板質(zhì)量的**基本要求。
(2). 制作方法
除另有規(guī)定外，將1份吸附劑加適量的水（如1份硅膠G一般加3份水）,在研缽中用研杵沿一個(gè)方向小心研磨**成均勻的有適當(dāng)粘稠度的膠漿,立即傾入涂布器中,均勻地向前推進(jìn)涂布在玻璃板上;或按照不同涂布器的規(guī)定操作涂布;涂布好的薄層板于室溫下在水平臺(tái)上晾干,再在規(guī)定的溫度(一般為105℃~110℃)下烘約30分鐘活化,貯于干燥器中備用。薄層板的厚度一般為 0.25~0.5mm.。
2. 商品化供應(yīng)的預(yù)制板和高效板 (1).板的尺寸
的干燥器中）。
3. 薄層板的保存
使用的硅膠，不用時(shí)一定要密封，防止吸潮。TLC所用的硅膠板一定要保存在干燥器里面，或使用前在紅外烘箱里干燥一段時(shí)間。
二、展開(kāi)劑的選擇
選擇展開(kāi)劑一般要用混合溶劑：一般要有一種對(duì)所要展開(kāi)樣品溶解度較大的溶劑，視樣品的極性，再選用相應(yīng)的體系 極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統(tǒng) 極性較大的用甲醇：氯仿系統(tǒng)
極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統(tǒng) 拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
選擇適當(dāng)?shù)恼归_(kāi)劑是shou要任務(wù).一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油迷<己烷<四氯化碳<苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<甲醇（乙醇）<水。展開(kāi)劑的比例要靠嘗試.一般根據(jù)文獻(xiàn)中報(bào)道的該類化合物用什么樣的展開(kāi)劑，就shou先嘗試使用該類展開(kāi)劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個(gè)分離效果好的展開(kāi)劑。很多時(shí)候,展開(kāi)劑的選擇要靠自己不斷變換展開(kāi)劑的組成來(lái)達(dá)到**佳效果。展開(kāi)劑的選擇條件：①對(duì)的所需成分有良好的溶解性；②可使成分間分開(kāi)；③待測(cè)組分的Rf在0.2~0.8之間，定量測(cè)定在0.3～0.5之間；④不與待測(cè)組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；⑤沸點(diǎn)適中，黏度較??；⑥展開(kāi)后組分斑點(diǎn)圓且集中；⑦混合溶劑**好用新鮮配制。
一般把兩種溶劑混合時(shí),采用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑,如果有分.
開(kāi)的跡象,再調(diào)整比例,達(dá)到**佳效果，如果沒(méi)有分開(kāi)的跡象，**好是換溶劑。
三、點(diǎn)樣
1. 小技巧：就是在點(diǎn)樣時(shí)食指放在點(diǎn)樣管的上端，當(dāng)點(diǎn)樣管的下端與硅膠板接觸的瞬間輕輕松動(dòng)上端的食指，溶液自然從點(diǎn)樣管出來(lái)，迅速提起點(diǎn)樣管，就這樣反復(fù)操作點(diǎn)出的斑點(diǎn)既小又均勻。
2. 點(diǎn)不能點(diǎn)得太濃，否則容易重疊，不易判斷，因?yàn)槿绻麅蓚€(gè)點(diǎn)相近的話，一濃就變成一個(gè)點(diǎn)了。而且濃度太大的話，點(diǎn)下的樣品不能被硅膠很好的吸收，不利于分離。
3. 板上點(diǎn)的展開(kāi)的清晰程度和溶劑的極性和物質(zhì)在該溶劑中的溶解性有關(guān)，只有兩者比較合適才能有一個(gè)交好的分離效果。
4. 某種樣品在這種展開(kāi)劑中只顯示一個(gè)點(diǎn)，并不等于在別的展開(kāi)劑中也只顯示一個(gè)點(diǎn)。因此在尋找展開(kāi)劑時(shí)，多嘗試幾種比例不同，成分不同的展開(kāi)劑。展開(kāi)劑的極性太小，點(diǎn)分不開(kāi)，極性太大，也分不開(kāi).一般以目標(biāo)產(chǎn)物的Rf值在0.3左右為**佳
5. 針尖不要刺破已經(jīng)鋪好的薄層板。點(diǎn)樣的時(shí)候手不能抖動(dòng)，動(dòng)作要輕，這些要*在于意會(huì)，逐漸鍛煉，相信你會(huì)體會(huì)到其中的快感。
