離子色譜法 離子交換色譜法 離子對(duì)色譜法的區(qū)別 

離子交換層析是依據(jù)各種離子或離子化合物與離子交換填料的結(jié)合力不同而進(jìn)行分離純化的。離子交換層析的固定相是離子交換填料，它是由一類不溶于水的惰性高分子聚合物基質(zhì)通過(guò)一定的化學(xué)反應(yīng)共價(jià)結(jié)合上某種電荷基團(tuán)形成的。離子交換填料可以分為三部分：高分子聚合物基質(zhì)、電荷基團(tuán)和平衡離子。     我們用 R 代表離子交換填料的高分子聚合物基質(zhì)，X-和X+分別代表陽(yáng)離子交換填料和陰離子交換填料中與高分子聚合物共價(jià)結(jié)合的電荷基團(tuán)，Y+和Y-分別代表陽(yáng)離子交換填料和陰離子交換填料的平衡離子，A+和A-分別代表溶液中的離子基團(tuán)。從上面的反應(yīng)式中可以看出，如果A 離子與離子交換填料的結(jié)合力強(qiáng)于Y 離子，或者提高A 離子的濃度，或者通過(guò)改變其它一些條件，可以使A 離子將Y 離子從離子交換填料上置換出來(lái)。也就是說(shuō)，在一定條件下，溶液中的某種離子基團(tuán)可以把平衡離子置換出來(lái)，并通過(guò)電荷基團(tuán)結(jié)合到固定相上，而平衡離子則進(jìn)入流動(dòng)相，這就是離子交換層析的基本置換反應(yīng)。通過(guò)在不同條件下的多次置換反應(yīng)，就可以對(duì)溶液中不同的離子基團(tuán)進(jìn)行分離。   

各種離子與離子交換填料上的電荷基團(tuán)的結(jié)合是由靜電力產(chǎn)生的，是一個(gè)可逆的過(guò)程。結(jié)合的強(qiáng)度與很多因素有關(guān)，包括離子交換填料的性質(zhì)、離子本身的性質(zhì)、離子強(qiáng)度、pH、溫度、溶劑組成等等。離子交換層析就是利用各種離子本身與離子交換填料結(jié)合力的差異，并通過(guò)改變離子強(qiáng)度、pH 等條件改變各種離子與離子交換填料的結(jié)合力而達(dá)到分離的目的。離子交換填料的電荷基團(tuán)對(duì)不同的離子有不同的結(jié)合力。一般來(lái)講，離子價(jià)數(shù)越高，結(jié)合力越大；價(jià)數(shù)相同時(shí)，原子序數(shù)越高，結(jié)合力越大。如陽(yáng)離子交換填料對(duì)離子的結(jié)合力順序?yàn)? 。蛋白質(zhì)等生物大分子通常呈兩性，它們與離子交換填料的結(jié)合與它們的性質(zhì)及pH 有較大關(guān)系。以用陽(yáng)離子交換填料分離蛋白質(zhì)為例，在一定的pH 條件下，等電點(diǎn)pI < pH 的蛋白帶負(fù)電，不能與陽(yáng)離子交換填料結(jié)合；等電點(diǎn)pI > pH 的蛋白帶正電，能與陽(yáng)離子交換填料結(jié)合，一般pI 越大的蛋白與離子交換填料結(jié)合力越強(qiáng)。但由于生物樣品的復(fù)雜性以及其它因素影響，一般生物大分子與離子交換填料的結(jié)合情況較難估計(jì)，往往要通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行摸索 

離子對(duì)色譜法是將一種(或多種)與溶質(zhì)分子電荷相反的離子(稱為對(duì)離子或反離子)加到流動(dòng)相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水型離子對(duì)化合物，從而控制溶質(zhì)離子的保留行為。其原理可用下式表示：X+水相+Y-水相===X+Y-有機(jī)相 

式中：X+水相--流動(dòng)相中待分離的有機(jī)離子（也可是陽(yáng)離子）；Y-水相--流動(dòng)相中帶相反電荷的離子對(duì)（如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基三甲銨等）；X+Y---形成的離子對(duì)化合物。 當(dāng)達(dá)平衡時(shí)： 

KXY=[X+Y-]有機(jī)相/[X+]水相[Y-]水相 根據(jù)定義，分配系數(shù)為： 

DX=[X+Y-]有機(jī)相/[X+]水相=KXY[Y-]水相 [討論：DX與保留值的關(guān)系] 

離子對(duì)色譜法(特別是反相)發(fā)解決了以往難以分離的混合物的分離問(wèn)題，諸如酸、堿和離子、非離子混合物，特別是一些生化試樣如核酸、核苷、生物堿以及藥物等分離